紫花杜鵑為杜鵑花科植物紫花杜鵑（Rhododendron mariae Hance）的干燥葉或帶葉嫩枝，味微辛、性微 溫，廣泛分布于廣東省嶺南、羅定、高要，云南麗江以 及四川寶興等地區(qū)。紫花杜鵑包含揮發(fā)油、黃酮、有 機酸、萜類、酚類、鞣質(zhì)等活性成分 ，其中黃酮類成 分藥用效果顯著。研究表明，紫花杜鵑的黃酮類 物質(zhì)具有祛痰止咳、殺菌消炎、鎮(zhèn)痛的效果，故在 單方和中藥復方制劑中都有廣泛的應用。目前以紫 花杜鵑入藥的中成藥很多，如紫花杜鵑片、紫花杜鵑 膠囊、祛痰止咳顆粒、祛痰止咳膠囊等，臨床上對慢性 支氣管炎有顯著的治療效果。

1　儀器與試藥

1.1 儀器　

Agilent 1220 高效液相色譜儀（安捷倫公 司）；BS 124S 十萬分之一電子天平（Sartourius 公司）； 昆山舒美KQ-250B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥　

對照品槲皮素（批號 100081-200406）、 槲皮苷（批號 111538-200302）、金絲桃苷（批號 111521- 200305）、蕓香苷（批號 100080-200306）均購自中國 食品藥品檢定研究院；水為娃哈哈純凈水；其他試劑 均為分析純。實驗所用紫花杜鵑藥材（編號 1~15） 于 2017 年 4 月至 6 月采自不同產(chǎn)地，由吉林省中醫(yī) 藥科學院趙全成教授鑒定均為正品。

2　方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為 ACE C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相 A 相為 0.2% 磷酸水，B 相為乙 腈溶液，梯度洗脫（0~15 min，90%A；15~25 min， 90%A → 85%A；25~35 min，85%A → 80%A；35~50 min，80%A → 70%A；50~60 min，70%A → 65%A； 60~70 min，65%A → 60%A）；流速為 1.0 mL·min-1 ； 檢測波長為 254 nm；柱溫為 30 ℃；進樣量為 10 μL。 色譜圖見圖 1。

2.2 對照品溶液的制備　

精密稱取對照品蕓香苷 10.10 mg、金絲桃苷 10.80 mg、槲皮苷 10.05 mg 和槲 皮素 5.15 mg，分別置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定 容至刻度，得單一對照品儲備液；分別精密量取蕓香 苷對照品儲備液 0.5 mL，金絲桃苷對照品儲備液 1.0 mL，槲皮苷對照品儲備液 3.0 mL，槲皮素對照品儲備 液 0.4 mL，置同一 10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度， 制得每 1 mL 含蕓香苷 0.010 1 mg、金絲桃苷 0.021 6 mg、槲皮苷 0.0603mg 和槲皮素 0.0041mg 的混合對 照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備　

取樣品（過 40 目篩）0.5 g，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加入甲醇約 40 mL，超 聲（功率 250W，頻率 40 kHz）提取 30 min，放至室 溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 線性關系考察　

分別精密量取混合對照品溶液 2、4、8、12、16、20µL 進樣測定，以峰面積Y為縱坐標，進 樣量 X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。 蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的回歸方程分別為 Y=2.638×103 X-1.73 r=0.999 6 Y=3.209×103 X-3.54 r=0.999 9 Y=2.100×103 X+11.43 r=0.999 5 Y=4.079×103 X-3.77 r=0.999 0線性范圍分別為0.0202~0.202μg、0.0432~0.432μg、 0.120 6~1.206 μg、0.008 2~0.082 μg，各成分進樣量與 峰面積呈線性關系。

2.5 精密度試驗　

取供試品溶液（2 號樣）10 µL，連 續(xù)進樣 6 次，記錄峰面積并計算，蕓香苷、金絲桃苷、 槲皮苷、槲皮素峰面積的 RSD 分別為 0.95%、0.54%、 0.72%、1.0%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復性試驗

精密量取供試樣品（2 號樣）6 份，按 照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按色譜條件規(guī)定進樣 測定其峰面積，計算蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷及槲皮素 的含量分別為 0.147%、0.265%、0.894%、0.020%，RSD 分 別為 0.93%、0.57%、0.69%、1.0%，表明該方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗　

取供試品（2 號樣），按照“2.3”項 下方法制備供試品溶液，分別于 2、4、8、16、24、48 h 進行測定，記錄峰面積，計算蕓香苷、金絲桃苷、槲皮 苷及槲皮素的含量，結果蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、 槲皮素含量的 RSD 分別為 0.91%、0.56%、0.69%、 1.0%，表明供試品溶液在 48 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3　討論

3.1　分析方法確定　

由于紫花杜鵑中成分具有多 樣 性，單 一 濃 度 甲 醇 - 水、乙 腈 - 水 不 能 將 有 效 成 分峰理想分離，所以經(jīng)過多次試驗擇優(yōu)，本實驗以乙 腈 -0.2% 磷酸水溶液為流動相，采用梯度洗脫，樣品 中蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素達到基線分離； 采用 254 nm 為檢測波長，使樣品中的目標峰和雜質(zhì) 峰完全分離；由于蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素 為黃酮類的低極性化合物，故選用不同濃度乙醇和甲 醇對提取溶劑進行考察，結果表明甲醇提取效果更 好；同時采用超聲和回流 2 種提取方法對提取方法 進行了考察，實驗結果表明，兩者提取效率接近，無明 顯差別，考慮到超聲提取操作簡單，故此選擇超聲提 取；提取時間考察結果表明，在 30 min 內(nèi)目標化合物 已充分溶解。

3.2 結果分析　

本實驗對不同產(chǎn)地和不同采收期的 紫花杜鵑干燥葉及嫩枝中的蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素進行含量測定，通過實驗看出，不同產(chǎn)地 的蕓香苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素含量明顯不同， 同一采收期藥材廣東羅定的含量最高，云南麗江的 含量最低，5 月份槲皮苷變化最為明顯。不同采收 期實驗結果表明，廣東 3 個地區(qū)的 5 月份采收的紫 花杜鵑中 4 個成分的含量最高，云南麗江及四川寶 興 6 月份采收的紫花杜鵑中 4 個成分的含量最高， 推測可能由于地區(qū)間的差異，使開花期延后所致，說 明紫花杜鵑在花開始開放還未完全開放時有效成分 的含量最高，可以為紫花杜鵑的采收期的確定奠定 基礎。 本研究采用建立的含量測定方法對含紫花杜鵑 藥材的中成藥進行 4 個黃酮成分的含量測定研究，實 驗結果表明，本方法適合于含紫花杜鵑藥材的中成 藥的含量測定，其分離度、耐用性等均符合規(guī)定。本實驗結果可以為紫花杜鵑藥材的質(zhì)量控制研究奠定 基礎。