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安石榴苷的含量測定-昆山舒美KQ500DE使用

返回列表 來源:未知 發布日期:2019-12-23 08:56【

阿那日五味散由石榴皮、肉桂、砂仁、蓽茇、干姜 5味藥材組成,具 有 溫 胃、消 食 之 功,臨 床 上 主 要 用 于胃脘寒濕、消 化 不 良、腎 寒 腰 痛 等 癥 的 治 療。 石榴皮多酚具有保護胃內粘膜的作用,石榴皮水浸 物能夠增強大鼠胃蛋白酶活性,促進膽汁分泌,安 石榴苷為其主要活性成分,具 有 抗 氧 化、抗 菌、 抗病毒、抑制腫瘤細胞增殖等活性。


1 儀器與試藥 


1.1 儀器 


LC-20AD 型 高 效 液 相 色 譜 儀(日 本 島 津公司),SPD-M20A 型 光 電 二 極 管 陣 列 紫 外 可 見 光檢測器(日本島津公司),NewClassicMF型分析 天平 (瑞 士 梅 特 勒-托 利 多 公 司,d=0.01 mg),KQ500DE型超聲 波 清 洗 器(昆 山 市 超 聲 儀 器 有 限 公司,功率250 W,頻率100KHz),Milli-Q 型艾柯 超純水儀(美國密理博公司),AgilentZORBAXSB- C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱(美國安捷倫 公 司 ),LINOMAT5 型 半 自 動 點 樣 儀 (瑞 士 CAMAG 公 司),EPROSTAR3型 薄 層 色 譜 數 碼 成 像系統(瑞士 CAMAG 公司)。 


1.2 試 藥 


阿 那 日 五 味 散 (自 制 制 劑,批 號 20170915;20171201;20180208;20180410;20180625), 安石榴苷對照品(成都曼斯特生物科技有限公司,批 號 MUST-18030501,純 度≥98 %),胡 椒 堿 對 照 品 (成都曼斯特生物 科技有限公司,批 號 MUST- 17051210,純度≥98%),硅膠 G 板(青島海洋化工, 批號20180412),硅膠 G 板(煙臺市芝罘黃務硅膠開 發試驗廠,批號20171104),硅膠 G 板(安 徽 省 良 辰 硅源 材 料 有 限 公 司,批 號 20180328),甲 醇 (美 國SIGMA 公 司,色 譜 純),水 為 純 化 水,試 劑 為 分 析純。 


2 方法與結果 


2.1 阿那日五味散中胡椒堿的TLC鑒別 


稱取阿那 日五味散1.5g,置于具塞錐形瓶中加入10mL無水 乙醇,超聲30min,濾過,即得供試品溶液。取胡椒堿 對照品適量,加無水乙醇制成濃度為500μg/mL的 對照品溶液。按照處方配比和制備方法,制備1.5g 不含蓽茇的 陰 性 樣 品,同 法 制 得 為 陰 性 樣 品 溶 液。 分別取上述供試品溶液、陰性樣品溶液各4μL和對 照品溶液3μL,點于同一硅膠 G 板上,以甲苯-乙酸 乙酯-丙酮(7∶2∶1)作 為 展 開 劑 展 開,取 出,晾 干, 置于紫外燈366nm 下 檢 視,結 果 供 試 品 色 譜 圖 與 對照品色譜圖相同位置處顯相同顏色的斑點,陰性 樣品色譜圖中相同位置處無斑點,見圖1。

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2.2 阿那日五味散中安石榴苷的含量測定 


2.2.1 對照品溶液的制備 


稱 取 安 石 榴 苷 對 照 品 適量,制成濃度為531μg/mL的甲醇溶液,備用。 


2.2.2 供試品溶液的制備 


稱取阿那日五味散0.1g, 置于50mL容量瓶中,用甲醇超聲提?。常埃恚椋?,放 至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,濾過,備用。 


2.2.3 陰性 樣 品 溶 液 的 制 備 


稱 取 不 含 石 榴 的 阿那日五味散陰性樣品0.1g,按“2.2.2”項下方法制備 陰性樣品溶液,備用。 


2.2.4 色 譜 條 件 


AgilentC18色 譜 柱(4.6 mm× 250mm,5μm),流動相:甲醇(流動相 A)-0.1%三 氟乙酸(流動相 B),梯度洗脫條件(0~10min:A% 為5%→20%,10~25min:A%為20%→40%,25~ 35 min:A% 為 40% →65%,35~40 min:A% 為 65%),進樣量:10μL,柱溫:30℃,檢測波長:370nm, 流速:1.0mL/min。


3 討論 


在對蓽茇的 TLC鑒別中,考察了不同檢 視條件、不同波長以及不同顯色劑對色譜結果的 影 響,結 果 表 明 在 紫 外366nm 直 接 檢視的效果優于噴顯色劑后的檢視效果,最終確定 直接在紫外燈366nm 下檢視。 安石榴苷對 照 品 溶 液 紫 外-可 見 區 全 波 長 掃 描 結果顯示,安石榴苷于258nm、370nm 處均有較強 的紫外吸收,以258nm 為 檢 測 波 長 的 HPLC 圖 譜 表明樣品中的其他物質峰與安石榴苷分離度不符合 色譜系統適用 性 的 要 求,在370nm 處 α-安 石 榴 苷 和β-安石榴苷響應值雖相對較低,但二者與其它物 質色譜峰分離度較好,因此確定安石榴苷的檢測波 長為370nm。




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