飛龍掌血為蕓香科飛龍掌血屬植物飛龍掌血 (Toddalia asiatica Lam.)的根或根皮,又名黃椒根、 血蓮腸、血見飛、血見愁、大救駕(貴州)、三百棒(湖 南、湖北、陜西)、散血丹(廣西),為中國傳統民族 藥 ,主產于廣西、廣東及貴州等地,具有活血化瘀、 止痛、止血、驅風除濕之功效 。藥理學研究表明, 該藥具有鎮痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤及抗血 小板聚集的作用;臨床上也常用于治療跌打損傷、 風濕性關節炎、多種痛癥和出血癥 。
1 儀器與試藥
1. 1 儀器
Agilent 1260 型超高效液相色譜系統、Lambda265 型 PDA 紫外檢測器,美國安捷倫有限公司;
DHG-9240A型電熱鼓風干燥箱,上海一恒科學實驗
儀器有限公司;Milli-Q Advantage A10型純水儀,美
國密理博超純水系統;SQP電子天平,賽多利斯(上
海)科學儀器有限公司;昆山舒美KQ5200B型超聲波清洗器,
昆山市超聲儀器有限公司;DFY-300C 型搖擺式高
速粉碎機,溫嶺市林大機械有限公司;H1650-W 型
離心機,湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司。
1. 2 試藥
黃酒(酒精度:7.12%),浙江越龍山紹興酒股份
有限公司釀造;甲醇、磷酸(分析純),國藥集團化學
試劑有限公司;乙腈(色譜純),德國賽默飛世爾科
技有限公司。
飛龍掌血根皮對照藥材(批號為121410-200701)、
白屈菜紅堿對照品(批號為 111718-201402),均為
中國食品藥品檢定研究院。
飛龍掌血藥材采購于廣西來賓市金秀鎮瑤都
廣場藥材街,經廣西中醫藥大學韋松基教授鑒定為
蕓香科飛龍掌血屬植物飛龍掌血T. asiatica Lam.的
根。
2 方法與結果
2. 1 藥材炮制加工
炮制加工方法以2015年版《中華人民共和國藥
典》 炮制通則中記載的方法為基礎,結合實際情
況改良而成,具體炮制方法如下。
水洗法:稱取大小分檔后飛龍掌血藥材10 g,平
行取3份,分別投入足量自來水中快速清洗,至藥材
表面浸潤無泥沙后取出,置60℃恒溫鼓風干燥箱內
干燥,干燥后打粉過篩,標簽備用。即得飛龍掌血水洗炮制品。
水煮法:稱取大小分檔后飛龍掌血藥材10 g,平
行取3份,分別置不銹鋼鍋內,加自來水至剛浸沒藥
材為度,文火加熱,煮至藥材變軟內無干心時取出,
置 60℃恒溫鼓風干燥箱內干燥,干燥后打粉過篩,
標簽備用。即得飛龍掌血水煮炮制品。
水蒸法:稱取大小分檔后飛龍掌血藥材10 g,平
行取3份,分別置不銹鋼蒸鍋內,加足量自來水后,
隔水加熱,待武火加熱至水沸后改文火加熱,蒸至
藥材變軟色澤暗淡時取出,置60℃恒溫鼓風干燥箱
內干燥,干燥后打粉過篩,標簽備用。即得飛龍掌
血水蒸炮制品。
酒蒸法:稱取大小分檔后飛龍掌血藥材10 g,平
行取3份,分別置不銹鋼蒸鍋內,加入適量黃酒后,
隔酒文火加熱,蒸至藥材變軟色澤暗淡時取出,置
60℃恒溫鼓風干燥箱內干燥,干燥后打粉過篩,標簽
備用。即得飛龍掌血酒蒸炮制品。
酒炙法:稱取大小分檔后飛龍掌血藥材10 g,平
行取3份,分別加適量黃酒與藥材拌勻悶潤,待酒被
吸盡后,用文火炒至藥材表面微干,呈暗棕色,略帶
焦斑時,取出晾涼,篩去灰屑后打粉過篩,標簽備
用。即得飛龍掌血酒炙炮制品。
2. 2 含量測定方法
2. 2. 1 對照品溶液的制備
精密稱取白屈菜紅堿
對照品0.74 mg,加甲醇定容至25 ml容量瓶,作為標
準對照品儲備液,備用。
2. 2. 2 供試品溶液制備
稱取藥材粉末和對照藥
材粉末各 0.2 g,精密稱定,置 50 ml 錐形瓶中,加甲
醇 10 ml,稱定,超聲提取 30 min,冷卻至室溫并補
重,搖勻,過濾,取續濾液至1.5 ml離心管中,14 465.5×g
離心10 min,吸取上清液備用。
2. 2. 3 色譜條件
色譜柱:Agilent TC-C18(250 mm×
4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈(A)-1%磷酸水溶液
(B);梯度洗脫:0~30 min,30%B;35~45 min,30%
B~45% B;45~50 min,45%B;50~51min,45% B~
15% B;流速:1.0 ml/min;檢測波長:320 nm;柱溫:
30℃;進樣量:10 μl。柱效以白屈菜紅堿峰計算,理
論塔板數不<5000。
在此色譜條件下,對照品溶液、對照藥材溶液
及藥材生品溶液進行測定,見圖1;譜圖1A顯示,白
屈菜紅堿對照品色譜峰峰型較好,保留時間為
36.879 min;譜圖1B飛龍掌血對照藥材色譜圖顯示
白屈菜紅堿色譜峰峰型良好,保留時間是 36.765min,分離度2.62>1.5,完全分離;譜圖1C飛龍掌血 藥材生品色譜圖顯示白屈菜紅堿色譜峰峰型良好,
保留時間是 36.580 min,分離度 5.78>1.5,完全分
離。
2. 2. 4 方法學考察
標準曲線與線性范圍:量取
2. 2. 1項對照品母液1.0 ml分別置1、2、5、10和25 ml
容量瓶中,加甲醇定容至刻度線,按2. 2. 3項色譜條
件進行測定,以峰面積(y)為縱坐標,濃度(x)為橫坐
標,得白屈菜紅堿的回歸方程 y=34.986x+15.421,
(r
2
=0.9992),線性范圍1.184~29.6 mg/L。
精密度:量取2. 2. 1項對照品母液1.0 ml置5 ml
容量瓶中,加甲醇定容至刻度線,按2. 2. 3項色譜條
件連續進樣6次,測得白屈菜紅堿峰面積的RSD為
2.61%(n=6),表明儀器的精密度良好。
3 討論
本研究以飛龍掌血的功能主治和臨床應用方 法為依據,通過研究水洗、水煮、水蒸、酒蒸、酒炙等 炮制方法對飛龍掌血中白屈菜紅堿含量變化的影 響,明確了白屈菜紅堿在不同炮制方法中的變化規 律,為飛龍掌血的炮制研究、臨床應用開發提供了 一定參考依據。
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